le kit 2-D Quant est conçu pour la détermination précise de la concentration en protéines dans des échantillons préparés pour des techniques d'électrophorèse telles que l'électrophorèse 2-D, le SDS-PAGE ou l'IEF.
Vue d'ensemble
le kit 2-D Quant est conçu pour la détermination précise de la concentration en protéines dans des échantillons préparés pour des techniques d'électrophorèse telles que l'électrophorèse 2-D, le SDS-PAGE ou l'IEF.
Il permet de déterminer avec précision la concentration en protéines en présence de 2 % de SDS, 1 % de DTT, 8 M d'urée, 2 M de thiourée, 4 % de CHAPS, 2 % de Pharmalyte et 2 % de tampon IPG.
Précipite quantitativement les protéines tout en laissant les substances interférentes.
Réponse linéaire dans la plage de 0 à 50 μg de protéines, avec des volumes d'échantillons recommandés de 1 à 50 μl.
Les méthodes spectrophotométriques courantes de quantification des protéines reposent soit sur la fixation du colorant de Coomassie, soit sur la réduction catalysée par les protéines de l'ion cuivrique (Cu2+) en ion cuivreux (Cu+). Les tests de fixation de colorant ne peuvent pas être utilisés en présence d'un réactif qui fixe également le colorant. Cela inclut les ampholytes porteurs et les détergents tels que PlusOne CHAPS, SDS et Triton X-100.
Les tests qui dépendent de la réduction de l'ion cuivre ne peuvent pas être utilisés en présence de réducteurs tels que le DTT, ou en présence de réactifs qui forment des complexes avec l'ion cuivre, tels que la thiourée ou l'EDTA.
La procédure du kit 2-D Quant consiste à précipiter quantitativement les protéines tout en laissant les substances interférentes. Le dosage est basé sur la liaison spécifique des ions cuivre aux protéines. Les protéines précipitées sont remises en suspension dans une solution contenant du cuivre et le cuivre non lié est mesuré à l'aide d'un agent colorimétrique. L'absorbance à 480 nm est inversement proportionnelle à la concentration en protéines.
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