Le kit NZYMaxiprep est conçu pour la préparation rapide et à grande échelle d'ADN plasmidique très pur (typiquement 500 µg) à partir de souches recombinantes d'Escherichia coli. L'ADN plasmidique se lie sélectivement aux colonnes NZYTech chargées d'une résine échangeuse d'anions à base de silice. Tous les contaminants, tels que les protéines, l'ARN, les sels, les nucléotides et les oligos (<40-mer) sont lavés de la colonne. Lors de l'étape d'élution, la charge positive de la résine est neutralisée par un changement de pH vers des conditions légèrement alcalines et l'ADN plasmidique pur est élué dans un tampon d'élution fortement salé. Pour isoler l'ADN de plasmides, BACs ou cosmides à faible nombre de copies, ou pour obtenir des concentrations d'ADN plus élevées, utiliser 500 ml de cultures d'E. coli et doubler les volumes de tampons M1, M2 et M3.
Caractéristiques :
- Maxi-préparation rapide d'ADN plasmidique pur
- Colonne à base de silice
- Rendement élevé d'ADN plasmidique (800-1000 µg d'ADN plasmidique à nombre de copies élevé par colonne)
Applications :
L'ADN plasmidique purifié peut être utilisé dans les applications de biologie moléculaire les plus exigeantes, notamment :
- Transfection
- Transcription in vitro
- Réactions enzymatiques
- Séquençage automatisé fluorescent ou manuel
- PCR
- Clonage
- Hybridation
Isolement et analyse de restriction ultérieure de deux plasmides d'ADN différents à nombre de copies élevé (1 et 2). L'ADN a été purifié avec NZYMaxiprep à partir de cultures d'E. coli cultivées dans un milieu LB. Par la suite, 1 μg de chaque préparation a été digéré avec Eco RI et les échantillons ont été séparés par électrophorèse sur un gel d'agarose à 1 %. Couloir M : échelle d'ADN NZY III.
Composants (*) :
- Tampon M1
- Tampon M2
- Tampon M3
- Tampon MEQ
- Tampon MW
- Tampon ME
- RNase A
- Colonnes Maxi Plasmid de NZYTech
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