Ce kit ELISA utilise le principe de l'ELISA compétitif. La microplaque ELISA fournie dans ce kit a été pré-enduite avec du Cort. Les standards ou les échantillons sont ajoutés aux puits appropriés de la microplaque ELISA, puis avec un anticorps spécifique de Cort conjugué à de la biotine. Ensuite, de l'avidine conjuguée à de la peroxydase de raifort (HRP) est ajoutée à chaque puits de la microplaque et incubée. Une solution de substrat TMB est ensuite ajoutée. La réaction enzyme-substrat est interrompue par l'ajout d'une solution d'acide sulfurique et le changement de couleur est mesuré par spectrophotométrie à une longueur d'onde de 450nm ± 10nm. La concentration de Cort dans les échantillons est ensuite déterminée en comparant la DO des échantillons à la courbe standard.
Données techniques
Comme les valeurs de DO de la courbe standard peuvent varier en fonction des conditions d'exécution du test (par exemple, opérateur, technique de pipetage, technique de lavage ou effets de la température), l'opérateur doit établir une courbe standard pour chaque test. Une courbe standard et des données typiques sont fournies ci-dessous à titre de référence uniquement.
Précision
Précision intra-essai (précision au sein d'un essai) : 3 échantillons avec un niveau faible, moyen et élevé ont été testés 20 fois sur une plaque, respectivement.
Précision inter-essais (précision entre les essais) : 3 échantillons avec un niveau faible, moyen et élevé ont été testés sur 3 plaques différentes, 20 répétitions dans chaque plaque, respectivement.
Taux de récupération
La récupération des produits dopés à trois niveaux différents dans les échantillons sur toute la plage de l'essai a été évaluée dans différentes matrices.
Linéaire
Les échantillons ont été dopés avec de fortes concentrations de protéines cibles et dilués avec le standard de référence et le diluant d'échantillon pour produire des échantillons dont les valeurs se situent dans la plage de l'essai.
---