Cette méthode est modifiée à partir des colorations Diff-Quick et Wright-Giemsa recommandées par l'OMS. Elle est destinée à l'examen par coloration de la morphologie des spermatozoïdes, de la cytologie des spermatozoïdes et de la cytologie de la prostate.
Principe :
Les protéines ayant des points isoélectriques différents dans les spermatozoïdes et les cellules portent des charges différentes au même pH et se lient donc sélectivement à des colorants différents. Les amido libérés par les protéines acidophiles portent des charges positives et se lient aux colorants acides (éosine) pour devenir rouges. Les carboxyles libérés par les protéines basophiles portent des charges négatives et se lient au colorant alcalin (bleu de méthylène) pour se colorer en bleu. Les protéines neutrophiles, dont les charges positives de l'amido libéré sont équivalentes aux charges négatives des carboxyles libérés, se lient simultanément au colorant acide et au colorant alcalin et apparaissent mauves. Cependant, comme les charges libérées sont égales, la coloration est faible. Le tampon peut empêcher l'interférence des substances acides et alcalines pour un résultat satisfaisant.
Méthodes :
Centrifuger le sperme liquéfié pendant 8 minutes (500 rpm) et retirer le surnageant. Laver le précipité avec une solution saline isotonique 2~3 fois pendant 5 minutes chacune (2 000 tours/minute). Pour les échantillons contenant de nombreux spermatozoïdes, prélever les spermatozoïdes liquéfiés au fond du tube, laver et centrifuger avec une solution saline isotonique 2~3 fois.
Ajouter une solution saline isotonique pour remettre en suspension le précipité de la centrifugation après le lavage. Pousser en tranches selon la méthode du film sanguin poussé. Sécher à l'air ou avec une ventilation.
Couvrir le frottis avec 1~2 gouttes de colorant A pendant 15~20 secondes (le colorant peut sécher à ce moment-là).
Laver le colorant A avec un tampon phosphate M/15, puis jeter le tampon brièvement.
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