Les mesures des niveaux d'expression de l'ARNm - que ce soit par analyse de Northern, protection par ribonucléase ou PCR quantitative en temps réel - sont généralement normalisées en comparant les données à celles obtenues pour un gène de référence interne ou endogène. Les gènes de référence tels que la bêta-actine et la glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH) sont le plus souvent utilisés car leurs niveaux d'expression sont censés rester constants dans différentes conditions de traitement. Malheureusement, cette hypothèse n'est pas toujours valable et les résultats basés sur les seuls gènes de maintien peuvent être biaisés (Suzuki, Higgins et Crawford 2000). Une meilleure méthode consiste à normaliser vos données en utilisant notre ADNc de référence humain pour la qPCR, le seul ADNc de contrôle entièrement dérivé de tissus humains.
l'ADNc de référence humain qPCR est le contrôle idéal pour comparer les données de différentes expériences de PCR quantitative (qPCR). Parce qu'il est préparé à partir d'un pool d'ARN total collecté à partir de plusieurs tissus différents, notre ADNc de référence humain qPCR offre une large couverture génique, comme le montre l'analyse par micropuces du matériel de départ ARN. L'ARN, et donc l'ADNc, préparé à partir de tissus entiers offre une meilleure représentation des gènes avec moins de variation que l'ARN produit à partir de lignées cellulaires (données non présentées). De plus, l'analyse PCR montre que notre ARN total est pratiquement exempt d'ADN génomique. Cela permet une mesure plus précise du nombre de copies de transcription. Les gènes à forte et à faible abondance sont bien représentés, ce qui permet de préparer une large gamme de standards dilués en série pour chaque test qPCR. La variation d'un lot à l'autre de l'ADNc de référence est minimale car la source d'ARN est préparée à l'échelle industrielle.
Vue d'ensemble
Large couverture génétique
Pratiquement exempt d'ADN génomique
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