Réactif solution de coloration TB (Ziehl-Neelsen)

colorantpour la microbiologiepour microscopie

Utilisation prévue: Pour l'identification des bactéries acido-résistantes du genre Mycobacterium, qui inclut le Mycobacterium tuberculosis responsable de la tuberculose. Principe: Ce kit de coloration est basé sur la coloration de Ziehl-Neelsen (une solution de carbolfuchsine) recommandée par l'OMS. Les bactéries acido-résistantes telles que Mycobacterium tuberculosis et Mycobacterium leprae sont difficiles à colorer en raison de leur capsule lipoïde dans la paroi cellulaire. Cependant, une fois que la capsule lipoïde est colorée avec un colorant amélioré tel que la carbolfuchsine, le composé nouvellement formé résistera à la décoloration par l'acide-alcool et conservera la couleur originale colorée (rouge), qui peut être facilement différenciée des autres micro-organismes qui absorbent encore la contre-coloration bleue. Méthodes: 1. Fixer le frottis avec une flamme puis ajouter la carbolfuchsine. Chauffer lentement et garder la coloration à la vapeur pendant 5 minutes. Éviter de vaporiser à sec ou de faire bouillir. 2. Attendre quelques minutes pour refroidir, rincer doucement à l'eau (Tamponner doucement la lame avec du papier buvard) 3. Décolorer pendant 2 minutes avec de l'acide alcool. 4. Rincer doucement à l'eau (si la couleur rouge est encore visible à la surface de l'échantillon, ajouter à nouveau de l'acide alcool jusqu'à ce que le rouge soit complètement décoloré). 5. Appliquer le bleu de méthylène pendant 30 secondes. Rincer doucement à l'eau et sécher à l'air. Examiner la lame finie au microscope. Spécifications: Contenu: 3 flacons de 100 ml/kit, 3 bouteilles de 250 ml/kit, 3x(6 bouteilles de 500 ml)/kit Composants: - Carbolfuchsine: 1x100ml, 1x250ml, 6x500ml (Carbolfuchsine, Phénol) - Acide alcool: 1x100ml, 1x250ml, 6x500ml (Éthanol, Acide chlorhydrique) - Bleu de méthylène: 1x100ml, 1x250ml, 6x500ml (Bleu de méthylène) Précaution: 1. Après chaque utilisation, refermer immédiatement le flacon de réactif pour éviter la vaporisation. 2. Pour les échantillons de crachat, le frottis doit être correctement épaissi pour augmenter le taux de détection. Pour un frottis plus épais, le temps de contre-coloration doit être contrôlé. L'examen microscopique sera affecté si le fond est trop sombre. 3. Occasionnellement, l'intensité de la coloration rouge peut être différente pour la même bactérie acido-résistante. Noter la différence d'intensité de la coloration rouge lors de l'observation. 4. Pour le stockage du kit, éviter l'exposition à des températures extrêmement élevées ou basses et à la lumière du soleil. 5. Lors de la coloration acido-résistante des lames pathologiques, la méthode de chauffage est recommandée. Pour de meilleurs résultats, le temps de coloration de la carbolfuchsine doit être supérieur à 5 minutes. Résultats attendus: Les espèces de Mycobacterium acido-résistantes apparaîtront en rouge vif, tandis que les autres bactéries et cellules seront bleues. Mycobacterium tuberculosis est une bactérie en forme de bâtonnet (bâtonnet droit ou courbé) Gram-positive, d'environ 1,3 à 3,5 µm de long et 0,3 à 0,5 µm de large. Elle ne forme pas de flagelles ni de spores. Mycobacterium peut être facilement coloré par la coloration acido-résistante. Au microscope, les bactéries acido-résistantes peuvent apparaître sous forme de bâtonnets en amas, ou sous forme de particules lors de la métamorphose. À un niveau cellulaire inférieur, certaines formes spéciales, telles que "V", "Y" et "T", peuvent être formées par la liaison de 2 à 3 cellules. - Destiné à l'identification des Mycobacterium acido-résistants (par exemple, M. tuberculosis) - Méthode de Ziehl-Neelsen (carbolfuchsine), recommandée par l'OMS - Contenu du kit: Carbolfuchsine, Acide alcool, Bleu de méthylène (volumes variés) - Précautions: Refermer les bouteilles après utilisation, contrôler le temps de contre-coloration, éviter les températures extrêmes, méthode de chauffage recommandée - Résultat attendu: Les bactéries acido-résistantes se colorent en rouge, les autres en bleu