Coloration à la fuchsine basique modifiée (sans chauffage) pour l'identification des bactéries acido-alcoolo-résistantes telles que Mycobacterium tuberculosis.
Principe :
Ce kit de coloration est basé sur la coloration de Ziehl-Neelsen (solution de fuchsine carboful) recommandée par l'OMS. Les bactéries acido-alcoolo-résistantes telles que Mycobacterium tuberculosis et Mycobacterium leprae sont difficiles à colorer en raison de la présence d'une capsule lipoïde dans la paroi cellulaire. Cependant, lorsque la capsule lipoïde est colorée avec un colorant renforcé tel que la carbolfuchsine, le composé nouvellement formé résiste à la décoloration par l'acide-alcool et conserve la couleur originale colorée (rouge), ce qui permet de le différencier facilement d'autres micro-organismes qui absorbent encore le colorant bleu de comptoir.
Méthodes :
Coloration à froid :
1. Fixer le frottis à la flamme, puis ajouter de la carbolfuchsine pour colorer pendant 5 minutes ou plus (sans chauffer).
2. Rincer délicatement à l'eau (éponger délicatement la lame avec du papier absorbant)
3. Décolorer pendant 2 minutes avec de l'alcool acide.
4. Rincer doucement à l'eau (si la couleur rouge est encore visible à la surface de l'échantillon, ajouter à nouveau de l'alcool acide jusqu'à ce que la couleur rouge soit complètement décolorée).
5. Appliquer du bleu de méthylène pendant 30 secondes. Rincer doucement à l'eau et sécher à l'air. Examiner la lame finie au microscope.
Précaution :
1. Cette méthode est également utilisée pour la coloration de chauffage.
2. Lorsque le décolorant est épuisé, nous recommandons aux utilisateurs d'acheter la solution auprès de Baso.
3. Après chaque utilisation, boucher immédiatement le flacon de réactif afin d'éviter toute vaporisation.
4. Pour les échantillons d'expectoration, le frottis doit être correctement épaissi afin d'augmenter le taux de détection. Pour un frottis plus épais, le temps de contre-coloration doit être contrôlé. L'examen microscopique sera affecté si le fond est trop sombre.
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