Le rouge pétrole est destiné à la coloration des graisses neutres.
Principe :
On pense que la coloration des lipides est liée aux propriétés physiques de la solution ou de l'adsorption. Les colorants présentent une plus grande solubilité dans les substances lipoïdes des tissus congelés que dans les solvants d'origine. Au cours de la coloration, les colorants migrent donc dans les lipides à partir des solvants organiques, ce qui entraîne une coloration des lipides.
Méthodes :
1. Couper le tissu congelé à une épaisseur de 6~10μm, rincer brièvement dans l'eau distillée.
2. Rincer le tissu dans de l'isopropanol à 60% pendant 20~30 secondes.
3. Préparer la solution de travail Oil Red O avec 6 ml de solution stock Oil Red O et 4 ml d'eau déminéralisée. Bien mélanger et laisser reposer pendant 10 minutes. Colorer dans la solution de travail Oil Red O pendant 5~10 minutes.
4. Rincer dans de l'isopropanol à 60 % pendant quelques secondes pour éliminer l'excès de colorant. Rincer à l'eau distillée.
5. Colorer les noyaux dans la solution d'hématoxyline de Mayer.
6. Différencier les lames dans de l'acide chlorhydrique à 1 % pendant quelques secondes.
7. Bleuir dans l'eau du robinet ou dans une solution diluée de carbonate de lithium pendant 10 minutes. Enlever l'excès d'eau autour.
8. Monter avec de l'arabine ou de la gelée de glycérine.
Précaution d'emploi :
1. Pour visualiser les lipides, colorer les tissus congelés plutôt que les tissus en paraffine, car les lipides sont facilement solubles dans les solvants organiques.
2. Le tissu congelé utilisé pour la coloration des lipides ne doit pas être trop fin. Dans le cas contraire, le contenu lipidique serait perdu.
3. Le temps de contre-coloration à l'hématoxyline de Mayer ne doit pas être trop long.
4. La coloration ne durera pas longtemps, il faut donc observer et prendre des photos dès que possible.
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