Ce kit est basé sur la méthode Ziehl-Neelsen recommandée par l'OMS et il s'agit d'une coloration chimique destinée à la détection des bactéries acido-alcoolo-résistantes telles que Mycobacterium tuberculosis.
Principe :
Les bactéries acido-alcoolo-résistantes telles que Mycobacterium tuberculosis et Mycobacterium leprae sont difficiles à colorer en raison de la présence d'une capsule lipoïde dans leur paroi cellulaire. Toutefois, lorsque la capsule lipoïde est colorée avec un colorant renforcé tel que la carbolfuchsine, le composé nouvellement formé résiste à la décoloration par l'acide-alcool et conserve la couleur originale colorée (rouge), ce qui permet de le différencier facilement d'autres micro-organismes qui absorbent encore le colorant bleu de comptoir. Le phénol est un mordant capable d'améliorer la capacité de coloration.
Méthodes :
1. Déparaffiner le tissu, ajouter de la carbolfuchsine, chauffer à l'aide d'une petite flamme et maintenir la coloration à la vapeur pendant 5 à 10 minutes. Éviter la vaporisation pour sécher ou l'ébullition.
2. Après refroidissement, rincer doucement à l'eau. Éponger délicatement la lame avec du papier absorbant.
3. Décolorer pendant 1~2 minutes avec de l'alcool acide.
4. Rincer doucement à l'eau (si du rouge est encore visible à la surface de l'échantillon, ajouter à nouveau de l'alcool acide jusqu'à ce que le rouge soit complètement décoloré. Continuer ensuite à rincer à l'eau).
5. Appliquer du bleu de méthylène pendant 20~30 secondes. Rincer doucement à l'eau.
6. Différencier dans l'éthanol à 95 % pendant 5 à 10 secondes.
7. Déshydrater dans l'éthanol absolu et nettoyer au xylène. Monter avec un milieu de montage.
8. L'étape de déshydratation présentée ci-dessus peut également être remplacée par un séchage à l'air.
9. Examiner la lame finie sous une lentille à immersion d'huile.
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