Kit de réactifs pour préparation d'échantillons KAPA RNA EvoPrep

ADN polyméraseADN ligasepour la recherche

Aperçu
Les kits KAPA RNA EvoPrep proposent un protocole simplifié de préparation de bibliothèques ARN pour le séquençage de nouvelle génération (NGS). Héritiers des KAPA RNA HyperPrep Kits, les EvoPrep convertissent l'ARN d'entrée en bibliothèques ligaturées aux adapteurs prêtes pour le séquençage, avec moins d'étapes et un temps de manipulation réduit. Destiné uniquement à des fins de recherche (RUO), non adapté aux procédures diagnostiques.

Kit KAPA RNA EvoPrep pour préparation de bibliothèques ARN

• Flux de travail rapide, environ 3,5 heures, avec temps de manipulation minimal
• Sensibilité : détecte davantage de transcrits uniques, y compris à partir d'ARN en faible quantité et dégradé (FFPE)
• Fiable : forte concordance entre différentes quantités d'entrée et résultats reproductibles

Avantages clés et points forts

• Protocole simplifié réduisant le temps de manipulation, la consommation de réactifs et le plastique
• Meilleurs taux de conversion des bibliothèques et rendements supérieurs sur une large plage d'entrées
• Capture accrue de molécules uniques (taux uniques mappés amélioré, duplication réduite et pourcentage d'adaptateur-dimère plus faible)
• Compatible avec l'automatisation : adapté aux systèmes de manipulation liquide et aux workflows Roche AVENIO Edge
• Contient une chimie de ligation améliorée (KAPA EvoT4 DNA ligase) et KAPA HiFi HotStart DNA Polymerase dans le mélange d'amplification pour une PCR à faible biais et haute fidélité

Performance et sensibilité
Les kits présentent des performances améliorées par rapport aux KAPA RNA HyperPrep Kits précédents et à plusieurs kits concurrents : ils détectent davantage de gènes et de transcrits pour des échantillons FFPET de faible qualité et pour des entrées basses (5 ng) à plus élevées (jusqu'aux maxima recommandés). Les données rapportées mettent en évidence : un nombre supérieur de gènes détectés dans les échantillons FFPET de faible qualité, des taux uniques mappés plus élevés, des taux de duplication réduits et des pourcentages d'adaptateur-dimère plus faibles.

Résumé du workflow

• Enrichissement initial optionnel : capture d'mRNA (billotes oligo-dT poly(A)) ou déplétion rRNA et/ou globine (hybridation avec oligonucléotides ADN complémentaires suivie d'un traitement RNase H/DNase)
• Fragmentation de l'ARN (chaleur + magnésium)
• Synthèse du 1er brin d'ADNc par amorçage aléatoire
• Synthèse du 2e brin et A-tailing combinés (dUTP incorporé dans le 2e brin pour la spécificité de brin)
• Ligation des adapteurs (ligation TA sur fragments A-tailed)
• Amplification de la bibliothèque avec une polymérase haute fidélité (le brin marqué par dUTP n'est pas amplifié pour maintenir la spécificité de brin)

Compatibilité et inputs recommandés
Tableau (variantes produit et inputs typiques) :
Product variant — Typical reactions — EAN
KAPA RNA EvoPrep (24rxn) — 24 reactions — 07613336240564
KAPA RNA EvoPrep (96rxn) — 96 reactions — 07613336240557
KAPA RNA EvoPrep Kit (384rxn) — 384 reactions — 07613336239308
KAPA mRNA EvoPrep (24rxn) — 24 reactions — 07613336239377
KAPA mRNA EvoPrep (96rxn) — 96 reactions — 07613336239384
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (24rxn) — 24 reactions — 07613336239315
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (96rxn) — 96 reactions — 07613336239322
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (384rxn) — 384 reactions — 07613336239339
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase Globin (96rxn) — 96 reactions — 07613336239353
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase Globin (384rxn) — 384 reactions — 07613336239360

Remarques sur les entrées et types d'échantillons : les plages d'entrée recommandées varient selon la variante du kit (exemples : 0,25 ng–100 ng pour certains kits RNA EvoPrep, 5 ng–1 µg ou 25 ng–1 µg pour d'autres). KAPA mRNA EvoPrep est destiné à de l'ARN de haute qualité (RIN ≥ 7) et aux workflows de sélection poly(A) ; les kits avec RiboErase (HMR) / Globin sont destinés à la déplétion d'humain/souris/rat et sont compatibles avec l'ARN FFPE de faible qualité lorsqu'ils sont utilisés avec les entrées et ajustements de protocole appropriés.

Stockage et manutention
Consignes typiques de stockage : les composants sensibles à la température (réactifs de synthèse d'ADNc et de préparation de bibliothèques) doivent être conservés à –15°C à –25°C ; certains composants d'enrichissement initial (par ex. capture mRNA) à 2°C–8°C ; KAPA HyperPure Beads à 2°C–8°C. Suivre la Notice d'utilisation pour les instructions exactes de stockage, manutention et points d'arrêt recommandés dans le protocole.

Remarque réglementaire / d'utilisation
Uniquement à des fins de recherche. Ne pas utiliser à des fins diagnostiques.

Caractéristiques techniques

• Famille de produits : KAPA RNA EvoPrep
• Application principale : préparation de bibliothèques ARN pour NGS (transcriptome complet, expression génique, jonctions d'épissage, fusions géniques, lncRNA)
• Options d'enrichissement : sans enrichissement (ARN total), capture mRNA (poly(A)), déplétion rRNA et/ou globine (HMR/Globin)
• Plages d'entrée (exemples par kit) : 0,25 ng–100 ng ; 5 ng–1 µg ; 25 ng–1 µg (dépend de la variante du kit)
• Durée de préparation (typique) : ~3,5 heures (protocole rationalisé)
• Fragmentation : chaleur + magnésium, ajustable selon la qualité d'entrée
• Spécificité de brin : Oui (incorporation de dUTP dans le 2e brin ; séquençage spécifique de brin)
• Chimie de ligation : KAPA EvoT4 DNA ligase
• Polymérase d'amplification : KAPA HiFi HotStart DNA Polymerase
• Nettoyage par billes : KAPA HyperPure Beads fournies pour les étapes de purification
• Automatisation : Compatible avec l'automatisation liquid-handling et le système Roche AVENIO Edge
• Compatibilité espèces : KAPA RNA EvoPrep (sans enrichissement) — large (eucaryotes, microbes, plantes, etc.) ; Kits avec RiboErase (HMR)/Globin — oligos de déplétion pour humain, souris, rat
• Avantages typiques : sensibilité améliorée (plus de transcrits uniques), taux uniques mappés plus élevés, duplication et adaptateur-dimère réduits, moins de réactifs et d'étapes de nettoyage